Práctica 0: Pipeteo de microvolúmenes

Inventario.

• Colorante I.
• Colorante II.
• Gradilla de 32 pocillos.
• Guantes.
• Micropipetas.
• Puntas desechables para micropipetas.

La gradilla de pocillos se divide en dos zonas, cada una de ellas específica para un ejercicio.

Ejercicio 1: Se realizará en la parte superior de la gradilla.

1. Pipetear 40μl del tubo Colorante I en el primer pocillo (esquina superior izquierda).
2. De los 40μl pipeteados en el primer pocillo, pipetear 20μl al segundo pocillo (situado debajo del primero).
3. Del segundo pocillo pipetear 10μl al tercer pocillo.
4. Del primer pocillo pipetear 10μl al cuarto pocillo.
5. Repetir el ejercicio en las otras trescolumnas, hastaconseguir un manejo correcto de la micropipeta.

Ejercicio 2: se realizará en la parte inferior de la gradilla.

1. Pipetear 80μl del tubo Colorante II en el primero pocillo inferior.
2. De los 80μl pipeteados en el primer pocillo, pipetear 40μl al segundo pocillo.
3. Pipetear 20μl del primer pocillo en introducir en el tercer pocillo.
4. Pipetear 20μl del primer pocillo e introducirlo en el cuarto pocillo.
5. Pipetear 20μl de segundo pocillo e introducir en el cuarto pocillo.
6. Repetir el ejercicio en las otras tres columnas, hasta conseguir un manejo correcto de la micropipeta.

Preguntas:

1. ¿Por qué es importante introducir la punta del líquido con el primer tope del émbolo apretado? Porque es necesario expulsar todo el aire para un correcto pipeteo. ¿Por qué es importante sacar la punta del líquido con el segundo émbolo apretado? Para poder sacar todo el líquido que contiene. ¿Afectaría a la práctica el no hacerlo de esta forma? Sí, ya que al tomar aire, estaríamos tomando mal el volumen inicial.
2. ¿Cómo son los volúmenes finales de los pocillos en el primer ejercicio en cada columna? El primer pocillo del ejercicio 1, tiene un volumen de 10μl, y el primer pocillo del ejercicio 2 tiene un volúmen de 0μl.
3. ¿Qué volúmen tiene el primer pocillo del segundo ejercicio al finalizar la práctica? 0μl. ¿Qué significa? Que todo el volúmen contenido en el inicio se ha distribuído en los demás pocillos. ¿Se ha pipeteado inicialmente la cantidad necesaria para hacer el ejercicio? Sí, ya que aunque no haya nada en el primer pocillo, el resto de la actividad se ha podido desarrollar correctamente.
4. ¿Qué volúmen final tiene el cuarto pocillo del segundo ejercicio respecto al tercero? Tiene 20μl más que el tercero. ¿A simple vista habrías asegurado lo mismo? Explica el por qué de este efecto visual. No, es posible asegurar que el cuarto pocillo tiene más volumen pero no exactamente cuanto. Al ser una medida tan pequeña, el menisco que forma puede ser definitivo para llevarnos al error.
5. ¿Qué efecto tendría utilizar una pipeta mal calibrada en la realización de esta práctica? Si se usa una pipeta mal calibrada, los volúmenes tomados son erróneos, por lo que la práctica completa habría salido mal.